（一）实验目的
1、了解生物组织中DNA的存在部位和形式。
2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
3、观察提取出来的DNA物质。
（二）实验原理
鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内 DNA与蛋白质结合成染色质。利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（三）实验材料
鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（四）试剂与仪器
1、2mol/L的NaCl溶液
称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂
A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液
称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管
DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（五）实验方法与步骤
1、提取细胞核物质
取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
（六）注意事项
（1）制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，使血液分层，取下层血细胞沉淀。
（2）获取较多DNA的关键是向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水，以便使细胞膜和核膜破裂，核内物质释放出来。
（3）实验中共有3次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。第1、3次要取其滤液，使用的纱布为1—2层，第2次是要取其滤出的黏稠物，使用的纱布为多层。
（4）实验中有6次搅拌，除最后一次搅拌外，前5次搅拌要朝向一个方向，并且在析出DNA，DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。
（5）实验中有两次使用蒸馏水。一次在第1步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，不应少于5min，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第3步，加水是为了稀释氯化钠溶液。
（6）实验中有三次加氯化钠溶液。在步骤2中，当加入氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离，并溶解在氯化钠溶液中。在步骤5中，加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。在步骤8中，加的NaCl溶液的浓度比前2次低的多，但还是为溶解DNA。
（7）在步骤7中，必须使用冷酒精（至少在5℃以下存放24h），并且将1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果悬浮在溶液中的DNA丝状物较少，可将混合液放入冰箱中再冷冻几分钟。
（8）本实验成功的关键，是保证提取到足量且较纯净的DNA。因为DNA在细胞中含量少，所以在下列步骤中应特别注意：在步骤1中使用的鸡血的量要在180mL左右。提取细胞核物质时要充分搅拌5min以上。在步骤2中要充分晃动烧杯，在步骤3中加蒸馏水要控制好量，同时应用玻璃棒缓缓搅动使DNA聚集其上。在第4步中要使用多层纱布过滤，在第5步中要充分搅伴，在第7步中使用冷酒精。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。
（9）盛放鸡血细胞液的容器和实验中的烧杯和试管最好也是塑料制的，因为玻璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA含量。
（七）实验现象与讨论
最后一次搅拌时，玻璃棒上会有乳白色丝状物出现，这就是DNA。用二苯胺试剂鉴定时会发现试管中溶液呈蓝色。
本实验较为复杂，对材料的量以及实验过程有较高要求。
讨论1、为什么在第4步“滤取DNA粘稠物”中纱布上的DNA粘稠物有的为血红色？
讨论2、有的同学在最后一步“DNA的鉴定”中，发现两支试管的颜色变化不很明显，其原因是什么？
